Полимеразная цепная реакция (ПЦР)

Полимеразная цепная реакция, или ПЦР – современный метод молекулярной биологии, считающийся «золотым стандартом». Он выручает, когда другие способы выявления микроорганизма уже не в состоянии обнаружить возбудителя. Достоверность высока настолько, что после положительного результата анализа вопрос о диагнозе не вызывает у специалистов затруднений.

Схема проведения метода

Суть реакции

Что это такое, вкратце можно объяснить следующим образом — при помощи определенных реагентов и специального оборудования происходит «штамповка» найденного генетического материала, он делается «видимым» для анализаторов.

В основе — многократное копирование определенного участка ДНК и РНК in vitro, «в пробирке», при помощи ферментов, протекающее в геометрической прогрессии. Для более точного описания синтеза используют выражение «эффект плато» — то есть, со временем скорость «сборки» вирусного генома замедляется, сходя на ноль.

Полимеразная цепная реакция возможна благодаря уникальности генома каждого организма — то есть, мы можем быть уверены, что найденный фрагмент принадлежит четко определенному, прописанному в базе данных, возбудителю.

Подготовка к исследованию

Как сдавать материал на анализ методом ПЦР, может объяснить практически любой медицинский работник. Для пациента подготовка не составляет сложностей — исследование не «заточено», в отличие от остальных, на выявлении реакции организма на болезнь. Каких-либо специальных манипуляций тоже проводить не нужно. То есть, даже если принять пищу и тут же сдать анализ крови на ПЦР, результаты не будут искажены.

Предмет исследования и выявляемые инфекции

Исследовать могут практически любой материал от пациента, в котором подозревают наличие генома возбудителя. К таковым относятся:

  1. ПЦР анализ крови тестирует кровь и ее компоненты (плазма и сыворотка) на вирусы гепатита В, С, В, G, герпесвирусы, в том числе ЦМВ, ВИЧ.
  2. Мокрота часто проверяется на туберкулез, хламидиоз, микоплазмоз.
  3. Биотпаты — в основном полученный в результате ФГДС материал проверяют на Helicobacter pylori (хеликобактерную инфекцию), вызывающую поражение желудка и двенадцатиперстной кишки.
  4. Соскобы со слизистых поверхностей исследуются преимущественно на патологии, передающиеся половым путем: гонорея, хламидиоз, уреаплазмоз, микоплазмоз, трихоманиаз, герпетическая инфекция.
  5. Моча тестируется при практически любом поражении мочевыделительных органов у женщин (цистит и пр.). У мужчин данный метод является альтернативой соскоба уретры и применяется для диагностики заболеваний мочеполового тракта,
  6. Фекалии. Анализ кала возможен на лямблии, ротавирусы, сальмонеллы и иные кишечные инфекции,
  7. Различные биологические жидкости — от слюны до спинномозговой и суставной на практически любые возбудители.
Читайте также:  Уколы от герпеса

Лямблии

Преимущества метода

  • Возбудитель определяется напрямую. Методом ПЦР из биологической жидкости «вылавливают» не защитные белки к какому-либо возбудителю, а непосредственно его ДНК и РНК. То есть, положительный результат свидетельствует о наличии патогенной частицы в организме.
  • Высокая специфичность — ложноположительные и ложноотрицательные результаты маловероятны. Метод выявляет уникальный, характерный только для определенного инфекционного агента генетический материал, является крайне достоверным.
  • Высокая чувствительность — концентрация возбудителя может быть невелика, материала — мало, но полимеразная цепная реакция способна выявить даже единичные клетки возбудителя — на такое не способен более ни один из известных методов,
  • Универсальность — из-за химических особенностей строения нуклеиновых кислот можно не только выявить любой геном в пробе, но и провести одновременный анализ на несколько ДНК или РНК.
  • Быстрота — все манипуляции, включая забор материала и обработку результатов, можно провести за 4-5 часов.
  • Возможность диагностики скрытых патологий — если иные методы исследования, применяемые в медицинской практике, не подходят для идентификации возбудителя, на помощь приходит полимеразная цепная реакция.

Недостатки метода

  • Обнаружение не только живого и опасного возбудителя, но и уже погибшего, чей генетический материал не успел вывестись из выздоравливающего организма.
  • Изменчивость микроорганизма может приводить к тому, что достоверность метода упадет. Разумеется, при разработке тестовой системы выбирается самый устойчивый к мутациям участок генома. Однако все предусмотреть невозможно, и даже в нем, в этой основе, могут произойти изменения. То есть система, имея «старый портрет» патогенной частицы, попросту не узнает «новый».
  • Теоретическая возможность ложноположительных результатов связана все с тем же геномом и его недостаточной расшифровкой. Ученые считают, что вероятно наличие одинакового фрагмента у разных микроорганизмов — то есть, прибор для проведения полимеразной цепной реакции может попросту перепутать, приняв неизвестный микробиологический агент за знакомую ему частицу.

Разновидности ПЦР и их значение

Существует два совершенно разных метода исследования в рамках полимеразой цепной реакции:

  • качественный, сообщающий о наличии или отсутствии в биоматериале генома искомого микроорганизма,
  • количественный, показывающий, как много вирусных частиц содержится в исследуемой ткани или жидкости.

Тонкости применения каждого из них лучше объяснить на примере определенной инфекции.

На гепатит С количественный анализ применяется довольно часто, и его результат – как, впрочем, любого подобного теста – можно расценить так:

  • положительный — недуг обнаружен у пациента с вероятностью 90-95%, циркуляция в крови микробиологической частицы не вызывает сомнений, необходимо лечение,
  • отрицательный — вирусных частиц в пробе не обнаружено, или настолько мало, что даже чувствительный качественный тест не смог обнаружить их.
Читайте также:  Таблетки Циклоферон: инструкция по применению

Алгоритм проведения реакции

Количественный метод тоже применяют при исследованиях ПЦР на гепатит, выявляют так называемую «вирусную нагрузку». Она означает количество единиц генетического материала вируса в пробе, имеет большое значение для определения стадии заболевания и тенденции лечения.

ПЦР-12

Инфекционные заболевания, передаваемые половым путем, можно определить за один анализ, воспользовавшись методом ПЦР «на 12 инфекций».

Данное обследование проводится:

  • в случае, если имел место незащищенный половой контакт со случайным партнером,
  • при появлении зуда, жжения, дискомфорта, рези и необычных, слишком обильных или «цветных» выделений из мочеполовых путей,
  • для контроля эффективности терапии инфекционных заболеваний,
  • перед оперативными вмешательствами на органах мочеполового тракта — это очень важно для профилактики распространения инфекции и предотвращения опасных осложнений,
  • для поиска причин бесплодия или невынашивания беременности.

В разных лабораториях спектр анализируемых микробиологических агентов немного разнится, но обычно присутствуют следующие:

  • хламидии,
  • микоплазмы,
  • уреаплазмы,
  • гарднереллы,
  • трихомонады,
  • герпесвирусы, в том числе цитомегаловирус,
  • вирус папилломы человека,
  • грибы рода Кандида.

Кандидоз на пальцах

Подчеркиваем, клиники могут расширять или сужать исследование на свое усмотрение. Иногда, например, анализ на ИППП включает ВИЧ и гепатит В и С, может содержать исследование на возбудителя сифилиса. Некоторые лаборатории «добирают» анализируемые инфекции до 12-ти за счет анализа на несколько видов уреаплазмы или микоплазмы.

Некоторые тонкости исследований ПЦР-12

ПЦР анализ на наличие хламидий очень достоверен и точен. Микробиология возбудителя вызывает сложности в диагностике — в отличии от иных инфекционных агентов, хламидии могут существовать только внутри клеток организма хозяина. Соответственно, доктору проще назначить ПЦР на хламидии, и быстро получить ответ на наличие генетического материала возбудителя в мазке, чем пытаться вырастить их на клеточной среде или пытаться «поймать» антитела в крови.

Анализ на герпес в данном случае не охватывает все его виды, так как приоритетом является диагностика заболеваний, передающихся половым путем.

Анализ на ВИЧ часто не включен в обследование у частых клиник по причинам российского законодательства:

  1. во-первых, медицинская организация должна иметь разрешение на проведение такого исследования,
  2. во-вторых, обязательно проверяются доноры и представители некоторых профессий, имеющих риск заразиться на рабочем месте — соответственно, иные лица могут отказаться,
  3. в-третьих, в последующем производится выдача официального документа о наличии или отсутствии вируса иммунодефицита в крови, что не могу сделать частные клиники,
  4. в-четвертых, проблема ВИЧ-инфекции настолько актуальна в современном обществе, что государство периодически организует бесплатные обследования — то есть, переплачивать не имеет смысла.
Читайте также:  Стоматит на деснах у взрослых и детей: симптомы и лечение

Помимо перечисленного, существует еще ряд тонкостей, которые можно узнать у своего доктора. Подводя итог относительно исследования на вирус иммунодефицита человека, можно сказать: лучше, проще и дешевле пройти ПЦР на ВИЧ в специализированных ВИЧ-центрах.

Анализ на гепатит так же может быть не включен в перечень. Чаще всего ПЦР на 12 ставят пациентам по поводу заболеваний мочеполового тракта гинекологи, урологи, дерматовенерологи — то есть все те специалисты, что работают «местно», с определенной локализацией недуга и определенными симптомами. Разумеется, доктора настороженно относятся к таким опасным заболеваниям, и при подозрении могут назначить анализ ПЦР на гепатит отдельно, но преимущественно их интересуют результаты исследования на инфекции урогенитального тракта.

Некоторые источники включают анализ крови на туберкулез в перечень 12-ти инфекций. Действительно, существует туберкулез половых органов, однако в данном случае полимеразная цепная реакция не проводится с целью выявить микобактерии. При этом действительно возможна постановка ПЦР на генетический материал М.tuberculosis.

Таким образом, анализ на ЗППП следует согласовывать со своим лечащим врачом, не стесняться высказывать подозрения и просить назначить дополнительные обследования.

Сроки и цены

Через какое время будут готовы результаты анализа на 12 инфекций, сообщат на месте исследования —обычно анализ и расшифровка занимают совсем немного времени, и спустя 2-3 дня обследуемый уже получает все необходимые документы. В условиях лечебных учреждений, когда важно провести обследование быстро, анализ крови ПЦР занимает всего несколько часов.

Цена разнится в зависимости от клиники, в среднем составляет около 3-4 тысяч рублей для анализа на целый комплекс урогенитальных инфекций. Качественный и количественный вариант исследования крови, например, для гепатита С, обойдется в 500 и 2000 рублей соответственно.

1 Звезда2 Звезды3 Звезды4 Звезды5 Звезд (Пока оценок нет)
Загрузка...
Понравилась статья? Поделиться с друзьями:
Информационный сайт, посвященный болезням: все о симптомах, профилактике и способах лечения